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依據(jù)檢測區(qū)域的取樣點數(shù),按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標準操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
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在超凈工作臺內(nèi),以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝,待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。
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將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30~35℃培養(yǎng)48小時。取出逐個檢查,確認無菌落數(shù)后即可使用。
2 采樣
將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與QA人員取樣。
3 儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基
浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿(φ90mm×15mm)、培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)、恒溫培養(yǎng)箱
4 儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求
浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。應(yīng)嚴格按儀器說明書的要求進行操作。采樣器必須按儀器的檢定周期,定期對儀器作檢定,以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性,檢驗項目有:定時器,轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速,流量計。每次測試前應(yīng)先接通電源,啟動真空抽氣泵,然后調(diào)節(jié)流量計和定時器?諝獠蓸恿扛鶕(jù)需要選定,已知采樣器的流量(L/min),設(shè)定采樣時間(min)兩者相乘即得采樣量(L)。采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造,采樣管嚴禁滲漏,內(nèi)壁應(yīng)光滑,采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測定點的高度定,盡量減少彎曲。
5 測試方法
測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。采樣器進入被測房間前先用消毒劑滅菌。用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。采樣前,先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面,采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌,如用消毒劑對采樣管的外壁、內(nèi)壁進行消毒,應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服,在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前,雙手用消毒劑消毒。
6 采樣程序
儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿,開動真空泵抽氣,使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā),時間不少于5min,并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵,放入培養(yǎng)皿,蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣品縫隙高度。置采樣器于采樣點后,開啟采樣器、轉(zhuǎn)動定時器,根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。
7 測試狀態(tài)
浮游菌測試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。測試狀態(tài)為靜態(tài)測試,并在報告中注明測試狀態(tài)。
8 測試人員
測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時,室內(nèi)人員不得多于2人。
9 測試時間
對單向流,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。對非單向流,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
最少采樣點數(shù)目及其布置,最小采樣量,見下表:
工作區(qū)測點位置離地0.8m~1.5m左右,送風口測點位置離開送風面30cm左右;可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。每個采樣點一般采樣一次。對于單向流或送風口,采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向;對于非單向流,采樣管口向上。布置采樣點時,至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風口1m以上。采樣時,測試人員應(yīng)站在采樣口的下風側(cè)。
10 培養(yǎng)
取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30~35℃培養(yǎng)48小時。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。
菌落計數(shù):用肉眼直接計數(shù),然后用5-10倍放大鏡檢查,是否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊,可分辨時,仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。培養(yǎng)結(jié)束,將上述培養(yǎng)后的平皿取出,逐個點計菌落數(shù),必要時用放大鏡檢查,并記錄。
11 結(jié)果計算
平均菌落數(shù)的計算見下式:
式中:
m為該房間(或區(qū)域)的平均菌落數(shù);
m1、m2‥‥‥mn為該房間(或區(qū)域)各取樣點的菌落數(shù);
N為培養(yǎng)皿總數(shù)
記錄:測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數(shù)據(jù)。